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巴氏染色液简介及注意事项

日期：2018-05-26 18:15:52

巴氏染色液gus(β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶(GUS)是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为 X-Gluc）分解为蓝色的物质，其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。因为绝大多数植物细胞内不存在内源的GUS活性，因此gus基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。

该试剂盒包含GUS染色的全部试剂，使用方便，只需将染色液和缓冲液按照比例混合即配成GUS染色液。该试剂盒可以配制50ml GUS染色液。保存条件：GUS染色浓缩液（50×）-20℃保存，GUS染色缓冲液4℃保存，GUS染色液建议现用现配。

使用说明：
巴氏染色液GUS染色液配制：
GUS染色浓缩液使用前用GUS染色缓冲液稀释50倍即配成GUS染色液。如0.1 mlGUS染色浓缩液加入到5 ml GUS染色缓冲液中，即配成5 ml GUS染色溶液。该染色溶液最好现用现配，短期贮存可以-20℃保存2-3天。

GUS染色步骤：
1.将准备好的材料浸泡在GUS染色液中，于25-37℃保温1小时至过夜。
2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。
3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。

巴氏染色液注意事项：
用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。